Design and Validation of Plasmid Vectors for Characterizing Protein–Protein Interactions in Spodoptera frugiperda Insect Cells
Ngày đăng : 01/07/2022

There are limited molecular biology resources for interrogating protein–protein interactions (PPIs) in insect cells. To address this deficiency, we developed plasmid vectors for localization, bimolecular fluorescence complementation (BiFC), and co-immunoprecipitation (co-IP) assays in Sf9 insect cells. Plasmids were designed to express a protein of interest as a fusion with epitope tags and autofluorescent proteins using the Gateway cloning system. Two robust interactors were utilized to validate this system: the nucleoprotein (N) and the phosphoprotein (P) of maize mosaic virus.The viral N was fused with the carboxy-terminal portion of eYFP and a FLAG epitope tag,and P was fused with the amino-terminal portion of eYFP and a myc epitope tag. The two expression plasmids were cotransfected into Sf9 cells, fluorescence microscopy was used to visualize BiFC, and co-IP was performed to confirm that this system was sensitive enough to detect PPI between the two proteins. BiFC was seen in cells cotransfected with N and P, and co-IP validated the interaction.This plasmid-based system can be used to investigate a variety of PPIs that occur in insects.We validated viral protein interactions that occur in the insect vector, which provides further insights into the biology of rhabdoviruses that are transmitted by insects. The ability to express viral and insect proteins in insect cells for studying PPIs with this streamlined system represents an advancement for protein research in insects.Future work will focus on identifying interacting viral and host proteins and discovery of targets for control of viruses and insect vectors

To view the article, click here

Các thông tin khác :
· Mapping of Crown Rust (Puccinia coronata f. sp. avenae) Resistance Gene Pc54 and a Novel Quantitative Trait Locus Effective Against Powdery Mildew (Blumeria graminis f. sp. avenae) in the Oat (Avena sativa) Line Pc54
· Gia Lai: Phấn đấu đến năm 2025 mở rộng diện tích chanh dây lên 20.000 ha
· Bưởi Diễn Hà Nội – Đặc sản có dần bị lãng quên?
· VIỆN KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM THÔNG BÁO TUYỂN DỤNG VIÊN CHỨC
· KIỂM TRA KẾT QUẢ THỰC HIỆN ĐỀ TÀI CẤP TỈNH
· KIỂM TRA VÀ ĐÁNH GIÁ MÔ HÌNH
· The genetic basis and interaction of genes conferring resistance to Puccinia hordei in an ICARDA barley breeding line GID 5779743
· The barley leaf rust resistance gene Rph3 encodes a predicted membrane protein and is induced upon infection by avirulent pathotypes of Puccinia hordei
· Molecular genetics of leaf rust resistance in wheat and barley
· Đã phát hiện rệp sáp bột hồng tại Việt Nam
· Triển vọng phát triển giống hồng giòn không chát ở Việt Nam
· TÊN KHOA HỌC CỦA SÂU CUỐN LÁ CHUỐI
· RẦY TRẮNG NHỎ HẠI LÚA
· Bệnh trắng lá mía tại Khánh Hòa
· THÔNG BÁO TUYỂN DỤNG
· HỘI NGHỊ GIỚI THIỆU TIẾN BỘ KỸ THUẬT SẢN XUẤT VỤ ĐÔNG CÁC TỈNH PHÍA BẮC
· Thông báo khoá học Laboratory Animal Science sẽ tổ chức tại Viện NC CNSH, Đại học Nông Lâm TP.HCM vào tháng 10
· Thông báo tuyển sinh đi học tại Nhật Bản theo học bổng Chính phủ Nhật Bản cấp năm 2018